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Vokabular
mikros- kopische Anatomie Fachtermini Deutsch + Englisch erklärt |
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Methodik:
- Perfusions- oder Immersionsfixation des Gewebes mit einer Lösung
nach Karnovsky (1965):
Lösung aus 2,5 %igem gepuffertem Glutaraldehyd +
2 % Paraformaldehyd in 0,1 M Natriumphosphatpuffer (Sörensenpuffer)
pH 7,4
- Gewebe über Nacht bei 4° C darin belassen
- Auswaschen 3 x 15 Minuten in 0,1 M Na-Phosphatpuffer mit 0,1 M Saccharose
- Nachfixierung 90 Minuten in 2 %igen Na-Phosphat-gepuffertem
Osmiumtetroxid pH 7,4
- Auswaschen 3 x 15 Minuten im 0,1 M Na-Phosphatpuffer pH 7,4
- Entwässerung 2 x 15 Minuten 50 % Aceton (in destilliertem Wasser)
- Kontrastierung über Nacht mit 70 % Aceton + 0,5 % Uranylacetat
+ 1 % Phosphowolframsäure bei 4° C
- 2 x 15 Minuten 80 % Aceton
- 2 x 15 Minuten 90 % Aceton
- 2 x 15 Minuten 96 % Aceton
- 3 x 20 Minuten 100 % Aceton
- 2 x 15 Minuten Propylenoxyd
- 30 Minuten 2 : 1 Propylenoxyd : Epon Mischung
- 30 Minuten 1 : 1 Propylenoxyd : Epon Mischung
- 30 Minuten 1 : 2 Propylenoxyd : Epon Mischung
- Eponlösung über Nacht bei 4° C
- Ausbettung in frische Eponlösung
- ca. 48 Stunden bei 65° C im Brutschrank polymerisieren lassen
- Schneiden mit dem Ultramikrotom Schnittdicke 50 - 100 nm
- Aufbringen der Schnitte auf Gitternetze oder mit einer speziellen
Gelatine überzogene Einlochnetze aus Kupfer oder Nickel
- Nachkontrastierung der Schnitte nach Reynolds (1963):
- 10 Minuten 8 % Uranylacetat
- 5 Minuten 0,7 % Bleicitrat + 0,9 % Natriumcitrat
- Nach Trocknung können die Schnitte im Transmissionselektronenmikroskop
untersucht werden